重庆幸运农场技巧规律大鼠乳酸脱氢酶(LDH)E

2018-06-01 20:03 点击:

  试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被大鼠乳酸脱氢酶(LDH)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的大鼠乳酸脱氢酶(LDH)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸

  血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

  保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

  高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

  分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用。

  标准品稀释液即可视为阴性对照或者空白;预处理后的样本无需稀释,直接取10L加样即可。

  注:标准品用标准品稀释液依次稀释为:8、4、2、1、0.5、0.25 IU/L

  ×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。

  手工洗板:甩尽孔内液体,每孔加满洗涤液,静置1min后甩尽孔内液体,在吸水纸上拍干,如此洗板5次。

  从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。

  随后标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100L,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

  弃去液体,重庆幸运农场技巧规律吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。

  每孔加入终止液50L,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。

  绘制标准曲线:在Excel工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应OD值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度值。