澳洲幸运快乐8全天计划群大鼠丙二醛(MDA)ELI

2018-05-28 06:56 点击:

  试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被大鼠丙二醛(MDA)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的大鼠丙二醛(MDA)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。

  1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,澳洲幸运快乐8全天计划群3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

  2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

  4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。

  5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

  1. 试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用。

  3. 标准品稀释液即可视为阴性对照或者空白;预处理后的样本无需稀释,直接取10L加样即可。

  20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。

  1. 手工洗板:甩尽孔内液体,每孔加满洗涤液,静置1min后甩尽孔内液体,在吸水纸上拍干,如此洗板5次。

  2. 自动洗板机:每孔注入洗液350L,浸泡1min,洗板5次。

  1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。

  2. 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50L;

  3. 待测样本孔先加待测样本10L,再加样本稀释液40L;

  4. 随后标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100L,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

  5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。

  绘制标准曲线:在Excel工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应OD值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度值。

  1. 准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.9900。