秒速时时彩是正规的吗大鼠肌钙蛋白Ⅰ(Tn-I)定

2018-05-27 06:08 点击:

  本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法(ELISA)。将标准品、待测样本加入到预先包被大鼠肌钙蛋白Ⅰ(Tn-I)单克隆抗体透明酶标包被板中,温育足够时间后,洗涤除去未结合的成分,再加入酶标工作液,温育足够时间后,洗涤除去未结合的成分。依次加入底物A、B,底物(TMB)在辣根过氧化物酶(HRP)催化下转化为蓝色产物,在酸的作用下变成黄色,颜色的深浅与样品中大鼠肌钙蛋白Ⅰ(Tn-I)浓度呈正相关,450nm波长下测定OD值,根据标准品和样品的OD值,计算样本中大鼠肌钙蛋白Ⅰ(Tn-I)含量。

  备注:标准品用标准品稀释液倍比稀释为:40、20、10、5、2.5、1.25 g/L.

  3、加标准品和待测样本:取足够数量的酶标包被板,固定于框架上,分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔,记录各孔位置,在标准品孔中加入标准品50L;待测样本孔中先加入待测样本10L,再加样本稀释液40L(即样本稀释5倍);空白对照孔不加。

  5、洗板:弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板4次(也可用洗板机按说明书操作洗板)。

  8、洗板:弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板4次(也可用洗板机按说明书操作洗板)。

  9、显色:每孔先加入显色剂A 液50L,再加入显色剂B液 50L,平板混匀器混匀30s(或用手轻轻震荡混匀30s),37℃避光显色15min。

  10、终止:取出酶标板,每孔加终止液50L,终止反应(颜色由蓝色立转黄色)。

  11、测定:以空白孔调零,在终止后15分钟内,用450nm波长测量各孔的吸光值(OD值)。

  12、计算:根据标准品的浓度及对应的OD值,计算出标准曲线的直线回归方程,再根据样本的OD值,在回归方程上计算出对应的样品浓度,也可以使用各种应用软件来计算。最终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。

  1、样本不能含叠氮钠(NaN3),因为叠氮钠(NaN3)是辣根过氧化物酶(HRP)的抑制剂。

  2、标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能立即试验,秒速时时彩是正规的吗可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。

  3、建议所有的标准品、样本和空白对照都做双份检测,取平均值,以减小实验误差。

  6、为避免交叉污染,标准品、样本和空白对照每加一个就要更换一次吸头;酶标工作液、样本稀释液和底物等公共组分,要悬臂加样,不得碰到微孔;不得重复使用封板膜。