秒速时时彩攻略人乳酸脱氢酶(LDH)Elisa试剂盒

2018-05-07 08:36 点击:

  使用目的:本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中乳酸脱氢酶(LDH)含量。

  实验原理:本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人乳酸脱氢酶(LDH)水平。用纯化的人乳酸脱氢酶(LDH)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入乳酸脱氢酶(LDH),再与HRP 标记的乳酸脱氢酶(LDH)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的乳酸脱氢酶(LDH)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中人乳酸脱氢酶(LDH)浓度。

  2 酶标试剂 6ml×1 瓶 8 标准品(16IU/L) 0.5ml×1 瓶

  3 酶标包被板 12 孔×8 条 9 标准品稀释液 1.5ml×1 瓶

  1.不能检测含NaN3 的样品,因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

  2.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融

  1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

  8IU/L 5 号标准品 150l 的原倍标准品加入150l 标准品稀释液

  4IU/L 4 号标准品 150l 的5 号标准品加入150l 标准品稀释液

  2IU/L 3 号标准品 150l 的4 号标准品加入150l 标准品稀释液

  1IU/L 2 号标准品 150l 的3 号标准品加入150l 标准品稀释液

  0.5IU/L 1 号标准品 150l 的2 号标准品加入150l 标准品稀释液

  2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50l,待测样品孔中先加样品稀释液40l,然后再加待测样品10l(样品最终稀释度为5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,秒速时时彩攻略尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

  5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

  9.显色:每孔先加入显色剂A50l,再加入显色剂B50l,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.

  10.终止:每孔加终止液50l,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

  11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

  计算:以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

  1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

  2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

  3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

  4.请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD 值大于标准品孔第一孔的OD 值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。