请问有谁知道血清乳酸测定试剂哪个好呀?可以

2019-01-30 19:31 点击:

  请问有谁知道血清乳酸测定试剂哪个好呀?可以上全自动生化分析仪的,我们现在用的结果偏高,受影响大

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  (1)全血乳酸测定(分光光度法):在NAD存在下,LDH催化乳酸脱氢,氧化成丙酮酸。加入硫酸肼使丙酮酸不断被转换消除,并促进反应完成。反应完成后生成的NADH与乳酸为等摩尔,在340nm波长下测定NADH的量,▓计算乳酸的含量。(2)血浆及血清乳酸测定(比色法):以氧化型辅酶Ⅰ(NAD)作氢受体,LDH催化L-乳酸脱氢,生成丙酮酸,NAD转变成还原型辅酶Ⅰ(NADH)。酚嗪二甲酯硫酸盐(PMS)将NADH的氢传递给氯化硝基四氮唑蓝(NBT),使其还原。在530nm波长的吸光度与乳酸含量呈线)全血乳酸测定(分光光度法):①50g/L偏磷酸(MPA):称取5.0g MPA,溶于蒸馏水中,并稀释到100ml,新鲜配制。②30g/L偏磷酸:称取3.0g MPA,溶于蒸馏水中,并稀释到100ml,新鲜配制。③Tris-硫酸肼缓冲液,pH9.6(Tris 79mmol/L;硫酸肼400mmol/L);取1mol/L氢氧化钠350ml,加入Tris 4.79g,硫酸肼26g,EDTA-Na2 0.93g,以1mol/L氢氧化钠调至pH 9.6,用蒸馏水稀释到500ml,4℃保存可稳定8天。④27mmol/L NAD溶液:根据需要量称取NAD溶于蒸馏水中,4℃可稳定48h。⑤LDH溶液:取LDH原液,用生理盐水稀释成1500U/ml(如用SigmaⅢ型LDH,该制品从牛心提制,每毫升含10mg蛋白,每毫克蛋白具有LDH活性400~600U,用盐水稀释成3mg/ml蛋白即可)。⑥1mmol/L(9.08mg/dl)乳酸标准液:精确称取L-乳酸锂9.6mg(或DL-乳酸锂19.2mg),以少量蒸馏水溶解,加入25μl浓硫酸,用蒸馏水稀释到100ml,4℃保存可长期稳定。(2)血浆及血清乳酸测定(比色法):①0.1mol/L Tris-HCl缓冲液(pH 9.0):取Tris 12.12g,溶于约800ml蒸馏水中,加入TritonX-100 40ml,混匀,以1mol/L盐酸调节至pH9.0,蒸馏水稀释至1L。②无乳酸蛋白液:取Sephadex G25,用蒸馏水充分溶胀后装柱。层析柱内径16mm,装柱高360mm。有蒸馏水反复流洗后,取20ml肝功能试验正常的混合血清上柱,用蒸馏水洗脱。待洗脱物开始出现混浊时收集,共收集20ml,加入少许氯化钠(约0.1g)及叠氮钠20mg,置冰箱保存。按本法测定乳酸(即无乳酸蛋白液代替标本进行测定),测定管与对照管吸光度之差应小于0.015。可按100ml上述缓冲液加无乳酸蛋白液5ml,混合后置冰箱保存。③乳酸脱氢酶溶液:用全血法。④5mmol/L乳酸标准液:溶解DL-乳酸锂96mg或L-乳酸锂48mg于蒸馏水中并稀释至100ml,4℃保存。LDH只催化L(+)-乳酸。⑤呈色剂:溶解NBT82mg于20ml蒸馏水中,可稍加热助溶,不溶物需离心去除。再加入NAD200mg,最后中入PMS 5mg,混合后置棕色瓶中,4℃保存,至少可用6个月。 (1)全血乳酸测定(分光光度法)①应在空腹及休息状态下抽血。不用止血带,不可用力握拳。如用止血带,应在穿刺后除去止血带2min后再抽血。最好用肝素化的注射器抽血,抽取后立即注入预先称量的含冰冷蛋白沉淀剂的试管中。如用血浆测定,每毫升血用10mg氟化钠及2mg草酸钾抗凝,立即冷却标本,并在15min内离心。抽血前试管编号,称重(Wt)并记录。加入6ml MPA(50g/L),再称重(Wm)后放入冰浴中,每份标本最好作双管分析。抽血后,立即注入上述试管中,每管2ml。颠倒混合3次,不可产生气泡。待试管温度与室温平衡后,再称重(Wb)。静置至少15min后,▓离心沉淀(400r/min,15min)。上清液必须澄清。计算稀释因数D:D=Wb-Wt/Wb-Wm②偏磷酸在水溶液易中形成多聚体(HPO3),水化成正磷酸(HPO3+H2O→H3PO4)。正磷酸不沉淀蛋白质,偏磷酸溶液沉淀蛋白的能力在4℃时仅能维持大约1周。③本法线mg/dl)。④本法不用过氯酸作蛋白沉淀剂。⑤一般乳酸锂未标明L-或DL-者,均为DL-型,L-型乳酸锂价格昂贵。(2)血浆及血清乳酸测定(比色法)混匀后,用分光光度计在530nm波长,10mm光径比色杯,以蒸馏水调零读取各管吸光度。①本法条件下,NBT还原生成物在反应液中十分稳定,无混浊和沉淀,吸光度久置不变。②肝素抗凝血浆、血库ACD保养液抗凝血浆、脑脊液、尿液、胃液等均可用本法测定。③加入蛋白质对反应及生成物溶液的稳定是必要的。▓同时加入蛋白质及表面活性剂,可提高灵敏度及稳定性。Brij-35和TritonX-100有同样效果。人血清白蛋白中含乳酸浓度较高,不适用。因人血清白蛋白的显色强度平均较牛血清白蛋白高1.06倍,如用牛血清白蛋白,且仅加于标准管中时,标准管吸光度须乘此数。④无乳酸蛋白液可与缓冲液预先混合后再加入1ml,▓代替表2中分别加入。⑤本法线mg/dl)。⑥吸光度随孵育时间延长而增加,必须准确10min。加入0.1mol/L盐酸后吸光度不变。▓⑦抗凝剂用肝素-氟化钠较好(1mg肝素,6mg氟化钠可抗凝5ml血)。血液抽出后,血标本管置冰浴中送检,尽快分离血浆,放冰室保存待测。草酸钾对LDH有一定抑制作用,抽血较少而草酸钾相对多时尤为明显。 (1)全血乳酸测定(分光光度法):全血乳酸0.5~1.7mmol/L(5~15mg/dl)。尿液乳酸为5.5~22mmol/24h。(2)血浆及血清乳酸测定(比色法):小于2.4mmol/L(22.0mg/dl,呈正偏态分布,95%百分位数上限)。 组织严重缺氧可导致三羧酸循环中丙酮酸需氧氧化的障碍,丙酮酸还原成乳酸的酵解作用增强,血中乳酸与丙酮酸比值增高及乳酸增加,甚至高达25mmol/L。这种极值的出现标志着细胞氧化过程的恶化,并与显著的呼吸增强、虚弱、疲劳、恍惚及最后昏迷相联系。即使酸中毒及低氧血症已得到处理,此种高乳酸血症常为不可逆的。见于休克的不可逆期、无酮中毒的糖尿病昏迷和各种疾病的终末期